王漿酸即10－羥基－2－癸烯酸(10－HAD)，是蜂王漿中特有的一種具有獨特生理生物活性的物質(zhì)，在鮮蜂王漿中含量為1.4%-2.0%左右，其占蜂王漿總脂肪酸比重的55%以上。研究發(fā)現(xiàn)，王漿酸具有增強免疫力、抗菌消炎、抗腫瘤、抗輻射、抗抑郁等功效。

由飲酒造成的急性酒精性肝臟損傷也是現(xiàn)代凸顯的社會主要病癥。長期的酗酒或大量的飲酒會損傷人體的健康，可能會導(dǎo)致人體內(nèi)器官、系統(tǒng)衰竭，造成一系列的健康問題。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)表明，2016年全球所有死亡人數(shù)中5.3%歸因于酒精，其中歐洲因酒精導(dǎo)致的死亡人數(shù)最多可達到10.8%。酒精性肝損傷是由于酒精在機體內(nèi)，通過引起氧化應(yīng)激導(dǎo)致氧化產(chǎn)物增加，誘使脂肪在肝臟聚集，發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致肝細胞進一步發(fā)生炎癥、壞死、纖維化和硬化。
目前酒精性肝損傷已成為僅次于病毒性肝炎的第二大類肝病，且酒精對肝臟的損傷缺乏特異性藥物，而現(xiàn)今市售保肝藥物，如糖皮質(zhì)類固醇、多烯磷脂酰膽堿、美他多辛等絕大多數(shù)的治療效果不明顯，而且往往具有副作用。因此，開發(fā)出安全有效的食品或保健品并通過營養(yǎng)干預(yù)預(yù)防酒精性肝損傷具有重要意義。
王漿酸具有明顯的生理活性，前期已研究發(fā)現(xiàn)王漿酸具有一定的緩解急性酒精中毒的功效，因此本研究通過建立小鼠急性酒精性肝損傷模型，研究王漿酸對急性酒精性肝損傷小鼠肝功能和血脂水平、肝臟抗氧化水平和機體酒精代謝情況的影響，并觀察其肝臟的組織病理學(xué)變化，來評價其護肝作用及初步探究其作用機制，為相關(guān)理論研究和王漿酸功能性食品的研發(fā)提供依據(jù)。

結(jié)果與分析
1、王漿酸對急性酒精性肝損傷小鼠體重及肝臟指數(shù)的影響
肝臟指數(shù)能夠直觀反映肝臟健康狀況，與陰性對照組比，模型組肝臟指數(shù)極顯著降低(P＜0.01)，說明模型組小鼠造模成功。與模型組比，雖然王漿酸低、中劑量組的肝臟指數(shù)無顯著性變化，但各劑量組和陽性對照組的肝臟指數(shù)均有所上升，肝臟均受到不同程度的緩解作用，且高劑量組和陽性對照組存在顯著性差異(P＜0.05)，說明王漿酸具有緩解酒精性肝損傷的作用。此結(jié)果與魏芬芬等關(guān)于枸杞多糖對小鼠酒精性肝損傷的保護作用及機制研究結(jié)果表現(xiàn)一致，表明肝臟指數(shù)隨護肝作用的增強而增加。

2、王漿酸對急性酒精性肝損傷小鼠生化指標的影響
與陰性對照組比，模型組小鼠血清中TC、TG、LDL－C、VLDL－C的含量均極顯著上升(P＜0.01)，表明攝入過量的酒精能夠引起脂代謝紊亂。與模型組比，除低劑量組VLDL－C的含量顯著性降低(P＜0.05)，其余各劑量組和陽性對照組血清脂質(zhì)指標含量均極顯著降低(P＜0.01)，高劑量組的降脂效果同陽性對照組相近。TG、TC、VLDL－C、和LDL－C常作為肝功能的輔助參考指標。當肝臟出現(xiàn)纖維化或者肝硬化時，其血脂指標一般表現(xiàn)為TG、TC、VLDL－C、LDL升高，HDL降低。本實驗結(jié)果同啜文婷等研究結(jié)果相同，說明王漿酸具有調(diào)節(jié)小鼠血脂代謝，緩解脂質(zhì)代謝紊亂的作用。

與陰性對照組比，模型組小鼠血清中AST和ALT活性極顯著升高(P＜0.01)。與模型組比，王漿酸各劑量組和陽性對照組的AST和ALT活性極顯著降低(P＜0.01)，其活性隨王漿酸劑量的升高而降低，且高劑量組的護肝效果最佳與陽性對照組效果相近。AST和ALT是廣泛應(yīng)用于檢測肝損傷的指標。羅安玲等報道，大量飲酒后，肝臟受到酒精及其代謝產(chǎn)物的毒性影響，細胞膜通透性改變，導(dǎo)致肝細胞胞漿內(nèi)AST和ALT進入到血液中，造成血清中活性升高。

這與本實驗?zāi)Ｐ徒M血清中AST和ALT活性顯著性升高的結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)王漿酸能夠降低AST、ALT的活性，這與張建軍等的研究結(jié)果相同，說明王漿酸具有降低急性酒精性肝損傷小鼠血清中AST和ALT活性的作用。分析其降低酶活性的原因可能是因為王漿酸具有保護細胞膜的功能，能夠調(diào)節(jié)細胞膜的通透性，使其通透性恢復(fù)到正常狀態(tài)，維持細胞器基本結(jié)構(gòu)的生態(tài)穩(wěn)定，從而減少了肝臟細胞中AST和ALT這兩種酶流入血液，表現(xiàn)為血清中兩種酶的活性隨著王漿酸劑量的升高而降低。

3、王漿酸對急性酒精性肝損傷小鼠機體酒精代謝的影響
與陰性對照組比，模型組小鼠肝組織中ADH活性都顯著升高(P＜0.05)，ALDH活性極顯著升高(P＜0.01)。與模型組比，王漿酸各劑量組和陽性對照組的ADH活性都極顯著升高(P＜0.01);對于ALDH活性，王漿酸低劑量組無顯著性變化，而中、高劑量組和陽性對照組都極顯著升高(P＜0.01)。
與陰性對照組比，模型組小鼠血清中ADH和ALDH酶活力均極顯著升高(P＜0.01)。
與模型組比，王漿酸低、中劑量組血清中ADH和ALDH酶活無顯著性變化，但高劑量組ADH酶活顯著升高(P＜0.05)，ALDH的酶活極顯著升高(P＜0.01);陽性對照組ADH和ALDH的酶活均極顯著升高(P＜0.01)。綜合分析，王漿酸對于解酒作用的功效，高劑量組效果最佳。

乙醇脫氫酶氧化體系是肝臟分解代謝外來酒精的主要方式，其中起到關(guān)鍵作用的是ADH和ALDH。ADH作為一種短鏈醇代謝酶，能將機體攝入的乙醇進行第一階段的催化分解生成乙醛。而ALDH的主要作用是把乙醛催化為乙酸，再經(jīng)過TCA循環(huán)最終生成CO2和H2O，消除酒精對肝臟的損傷。
本實驗從血清和肝臟組織兩個角度對ADH和ALDH進行檢測分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠一次性大量攝入酒精后，機體產(chǎn)生自然應(yīng)激反應(yīng)代謝分解酒精以緩解對肝臟的損傷，模型組和劑量組肝臟內(nèi)的ADH和ALDH活力會明顯升高，并與劑量成正相關(guān)。
本結(jié)果與白美美對連翹葉茶保肝作用研究中表現(xiàn)出來的結(jié)論一致，分析原因可能是由于王漿酸具有輔助性刺激肝細胞進行乙醇代謝的催化作用。

4、王漿酸對急性酒精性肝損傷小鼠肝組織抗氧化能力的影響
與陰性對照組比，模型組的SOD、GSH－Px活力和GSH的含量極顯著降低(P＜0.01)，而MDA含量極顯著增加(P＜0.01)，說明模型組的肝臟抗氧化能力減弱。與模型組比，王漿酸各劑量組和陽性對照組的GSH－Px、SOD活力和GSH含量極顯著增加(P＜0.01)，而MDA含量極顯著降低(P＜0.01)。
SOD和GSH－Px是機體主要的抗氧化酶，MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，能反映機體的脂質(zhì)過氧化程度，間接反映細胞損傷的程度。當攝入過量的酒精時，會造成肝細胞發(fā)生脂質(zhì)過氧化，生成過量的氧自由基造成氧化應(yīng)激，最終促進脂質(zhì)氧化過程。
從結(jié)果可看出王漿酸能夠增加GSH－Px、SOD活力和GSH含量，減少MDA的含量，因此王漿酸有一定的抗氧化能力，能夠緩解肝細胞脂質(zhì)過氧化進程，起到對肝臟的保護作用。

與陰性對照組比，模型組小鼠MAO活力極顯著升高(P＜0.01)，TNOS和iNOS活力極顯著降低(P＜0.01)。與模型組比，王漿酸各劑量組和陽性對照組的MAO活力極顯著降低(P＜0.01)，而除低劑量組的TNOS活力無顯著性變化，其余各組TNOS和iNOS活力極顯著增加(P＜0.01)。說明王漿酸具有良好的護肝效果，且與劑量成正相關(guān)。

有研究表明，MAO參與膠原代謝，使膠原和彈性硬蛋白結(jié)合，形成膠原纖維導(dǎo)致肝臟纖維化，是評價肝臟損傷的重要指標。NO具有舒張血管、抑制血管平滑肌的增殖和中性粒細胞浸潤等功能，但其又能生成具有毒性的過氧化亞硝酸鹽，導(dǎo)致組織損傷。常用NOS指標來反映NO，而NOS在機體內(nèi)分為nNOS、eNOS和iNOS，當組織受到損傷時iNOS會產(chǎn)生應(yīng)激效果，使其活力升高，iNOS活性升高會引起NO的合成增加。
從結(jié)果可看出王漿酸能夠降低MAO的活性，提高TNOS和iNOS的活性來達到護肝的效果。其護肝途徑可能是通過iNOS活力的升高，帶動NO含量的提高，NO可以舒張血管，加快血液循環(huán)，加速酒精代謝產(chǎn)物CO2和H2O的排除，輔助起到護肝的效果。

5王漿酸對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟病理組織形態(tài)的影響
陰性對照組小鼠肝臟結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉排列整齊，肝細胞以中央靜脈為軸心呈大致輻射狀排列。模型組的肝細胞索紊亂，肝細胞腫脹呈氣球樣變，胞質(zhì)疏松，胞質(zhì)內(nèi)能夠觀察到脂肪空泡和水樣變性且大小不等、數(shù)量不一，多個壞死在小葉內(nèi)發(fā)生呈現(xiàn)點狀或灶型，炎細胞侵入到匯管區(qū)中數(shù)目眾多。王漿酸低劑量組肝臟組織情況與模型組情況近似。
王漿酸中、高劑量組肝組織情況均有明顯緩解，肝細胞胞質(zhì)較為緊密，脂肪空泡和水樣變性數(shù)量明顯減少，小葉內(nèi)壞死程度明顯降低，匯管區(qū)有少量炎細胞侵潤。陽性對照組肝組織有明顯的治愈效果，肝臟組織結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉排列基本整齊，肝細胞呈正常多邊形，胞質(zhì)內(nèi)脂肪空泡和水樣性變數(shù)量較少。

結(jié)論
王漿酸對急性酒精性肝損傷小鼠的肝臟具有保護作用，王漿酸能夠升高肝臟指數(shù)，同時降低血清中TC、TG、VLDL－C和LDL的含量，降低血清中AST、ALT活性來達到其護肝作用，并且王漿酸中、高劑量組能夠有效減少肝臟組織中脂肪空泡和水樣變性情況的發(fā)生，維持肝細胞正常生態(tài)生理結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。
通過王漿酸能夠促進ADH、ALDH的分泌，提高SOD、GSH－Px、TNOS、iNOS活性和GSH的含量，降低MDA的含量和MAO的活性，初步探究其護肝機制可能是通過對肝臟細胞因子進行輔助調(diào)節(jié)，加速酒精代謝分析，減少脂質(zhì)過度積累，從而降低一次性大量酒精攝入對肝臟造成的損傷程度，并且若長期服用王漿酸還可有效地增強肝臟抗氧化能力。以上結(jié)果說明王漿酸具有護肝功能，為其功能性食品的進一步開發(fā)利用，提供了一定的理論依據(jù)。
（來源：王漿酸對小鼠酒精性肝損傷的保護作用；《食品工業(yè)科技》；2020(041),003）